Флороценоз

Подпишитесь
на новости ИЛС

Ваш e-mail:


(бесплатно для звонков по РФ) 8 (800) 100-28-84
+7 (495) 664-28-84

Региональные представители

О КОМПАНИИ НОВОСТИ МЕРОПРИЯТИЯ ЗАКАЗ ON-LINE ОБРАТНАЯ СВЯЗЬ ВАКАНСИИ КОНТАКТЫ

Проведение ПЦР, ПЦР в реальном времени

Изобретение полимеразной цепной реакции (ПЦР) в 1985 году привело к революции в молекулярной биологии и молекулярной медицине. Основные области исследований, такие как поиск биомаркеров, регуляция генов и исследования в области онкологии, оказались тесно связаны с данной технологией. Современные требования к ПЦР предъявляются самые высокие: высокая производительность, специфичность, скорость, возможность автоматизации.

Важными компонентами смеси ПЦР являются: ДНК полимераза, проявляющая специфические свойства, необходимые для решения поставленных задач (горячий старт, повышенная специфичность, увеличение длины прироста цепи и др.); состав буфера, содержащего дополнительные компоненты для увеличения чувствительности и специфичности.

Типы полимеразно-цепных реакций:
  • Стандартная ПЦР (Standard PCR)
  • Стандартная ПЦР, горячий старт (Standard PCR, hot-start)
  • Высокочувствительная ПЦР (High-fidelity PCR)
  • Высокоскоростная ПЦР (Fast-cycling PCR, hot-start)
  • ПЦР для длинных фрагментов ДНК (Long-range PCR)
  • ПЦР для сложных фрагментов ДНК (Multiplex PCR)
  • Генотипирование (STR, микросателиты) (Genotyping [STR, microsatellites])
  • Амплификация SNP локусов (Amplification of SNP loci)
  • Генотипирование (определение мутаций) (Genotyping [mutation detection])
  • Одноклеточная ПЦР (Single-cell PCR)
  • ПЦР специфичная на метилирование (Methylation-specific PCR [MSP])
  • ПЦР с внутренними праймерами (Nested PCR)
  • Анализ вирусной ДНК (DNA virus detection)

Компания QIAGEN предлагает множество решений для проведения ПЦР и ПЦР в реальном времени всех типов, которые представляют собой готовые к применению наборы реагентов, включающие в свой состав все необходимые компоненты для ПЦР кроме праймеров.

>>Наборы реагентов для чтения длинных фрагментов ДНК, проведения высокочувствительной ПЦР, высокоскоростной ПЦР

>>Наборы реагентов для проведения мультиплексной ПЦР

>>Наборы реагентов для проведения ПЦР в реальном времени

>>Гид для выбора набора ПЦР, характеристики

 

Наборы реагентов разделены на 2-е обширные группы:

Формат набораСостав Назначение
Отдельные реагентыTaq ДНК – полимераза Буферные растворы (QIAGEN PCR Buffer, 10x; CoralLoad PCRBuffer, 10x) Q-Solution, 5x dNTP Mix, 10 мМ MgCl2, 25 мМ Возможность варьирования концентраций компонентов реакционной смеси для подбора условий проведения ПЦР.
Мастер-микс Полимераза, буфер, дополнительные компоненты (Q-раствор, факторы MP или SB), мононуклеотиды, ионы Mg2+Валидированный состав наборов реагентов для конкретных задач.


Полимеразы, входящие в состав наборов реагентов для ПЦР QIAGEN

Набор, полимераза

Ед.

Кат. №

Комментарий

Отличия

Taq DNA Polymerase

250

201203

Рекомбинантная ДНК полимераза из Thermus aquaticus (94 кДа), для постановки стандартных ПЦР

Стандартная полимераза

1000

201205

5000

201207

25000

201209

TopTaq DNA Polymerase

50

200201

Хранение при +4°С; повышенная стабильность

250

200203

1000

200205

5000

200207

HotStarTaq DNA Polymerase

250

203203

Модифицированная рекомбинантная ДНК полимераза из Thermus aquaticus (94 кДа), клонированная в E. coli, для постановки ПЦР с "горячим стартом", амплификации SNP локусов, специфичной на метилирование ПЦР, ПЦР с внутренними праймерами, анализа вирусной ДНК

Активация при 95°С 15 мин;

1000

203205

5000

203207

25000

203209

HotStarTaq Plus DNA Polymerase

50

203601

Активация при 95°С 5 мин;

250

203603

1000

203605

5000

203607

25000

203609

QuantiNova DNA

Polymerase

100

208252, 208052

Модифицированная рекомбинантная ДНК полимераза из Thermus aquaticus (94 кДа) вместе с QuantiNova Antibody и QuantiNova Guard для предотвращения неспецифической активации

Активация при 95°С 2 мин;

500

208254, 208054

2500

208256, 208056


Ключевые характеристики полимеразы:

5'–3' экзонуклеазная активность – 5 ед./мкл, скорость удлинения – 2…4 кБ/мин при 72°С, период полуинактивации – 10 мин при 97°C; 60 мин при 94°C, точность – до 3 ошибок на 102 п.о.

Особенности полимеразы «QuantiNova DNA Polymerase»:

Буфер с полимеразой содержит антитело «QuantiNova Antibody» и полимерный компонент «QuantiNova Guard», которые, связываясь с ферментом, значительно повышает его стабильность (возможность хранения более 100 ч при 30°С без изменения в активности), что позволяет работать с мастер-миксом без использования охлаждающих агентов, а также увеличивает чувствительность и специфичность системы в целом. Кроме того, высокая стабильность данного мастер-микса делает его весьма привлекательным для использования в автоматизации ПЦР исследований. Активация полимеразы осуществляется при 95°С в течение 2-х мин, в результате чего антитело и полимер денатурируют и высвобождают фермент.

Кроме того, мастер-микс содержит краситель (синий), который, смешиваясь с красителем в составе буфера, добавляемого к образцу (жёлтый), приобретает зелёный оттенок. Данное свойство позволяет визуально легко контролировать правильность формирования ПЦР-смеси.


Буферы, их компоненты, их состав и назначение

Буфер, компонентСостав, назначение
QIAGEN PCR Buffer, 10xОптимизированная концентрация ионов K+ и NH4- для увеличения специфичности связывания праймеров (Tris•Cl, KCl, (NH4)2SO4, 15 мМ MgCl2; pH 8.7 (20°C)).
CoralLoad PCR Buffer, 10xСодержит красители для проведения ПЦР и разделения нуклеотидов после ПЦР (электрофорез) без дополнительных манипуляций.
QuantiNova Probe PCR BufferБуфер с красителем (синий) входит в состав мастер-микса QuantiNova, меняет цвет на зелёный при смешивании с QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer.
QuantiNova Yellow Template Dilution BufferБуфер с красителем (жёлтый) добавляется к образцу, меняет цвет на зелёный при смешивании с QuantiNova Probe PCR Buffer, входящий в состав мастер-микс QuantiNova.
Фактор MPДля увеличения специфичности связывания праймеров с матрицей (Патенты US6084102, US6312894, US6426408).
Фактор SBПредотвращает деградацию праймеров полимеразой с 3'–5' экзонуклеазной активностью.
Q-растворДля связывания праймера с полимеразой, сокращает время ПЦР в 3 раза!


Наборы реагентов для чтения длинных фрагментов ДНК, проведения высокочувствительной ПЦР, высокоскоростной ПЦР

Наборы реагентов206401 QIAGEN LongRange PCR Kit (20), 206402 (100), 206403 (250) 202602 HotStar HiFidelity DNA Polymerase (100U), 202605 (1000U)203743 QIAGEN Fast Cycling PCR Kit (200),
203745 (1000),
203747 (5000)
НазначениеПЦР для чтения длинных фрагментов ДНК Высокочувствительная ПЦР Высокоскоростная ПЦР
ПолимеразаСмесь ДНК – полимераз (Taq и Pfu) (обладают 3’-5’ экзонуклеазной и 5’-3’ экзонуклеазной активностями) HotStar HighFidelity ДНК – Pfu-полимераза (выделена из Pyrococcus furiosus., химически модифицирована, 3’-5’ экзонуклеазная активность) HotStarTaq Plus ДНК – полимераза
БуферLongRange PCR Buffer (оптимизирован для Taq и Pfu полимераз), Q-раствор HotStar HiFidelity PCR Buffer (содержит KCl и (NH4)2SO4 (K+, NH4+), фактор SB), Q-раствор Fast Cycling PCR Buffer, Q-раствор, dNTPs, Mg2+
Длина фрагмента≤ 40000 п.о. ≤ 5000 п.о. (до 5 ошибок на 105 п.о.) ≤ 3500 п.о., быстрее в 3 раза!

наверх

Наборы реагентов для проведения мультиплексной ПЦР

Название набораНазначениеАртикулКоличество реакций
Type-it Microsatellite PCR KitМультиплексный ПЦР STR-анализ Анализ микросателит 206241
206243
70
200
Type-it Mutation Detect PCR KitМультиплексный ПЦР Амплификация SNP локусов Определение мутаций 206341
206343
70
200
QIAGEN Multiplex PCR KitМультиплексный ПЦР Генотипирование (STR-анализ, определение мутаций) Амплификация SNP локусов 206143
206145
100
1000
EpiTect MSP KitПЦР специфичная на метилирование59303
59305
59307
25
100
400

Мастер-микс:

  • Полимераза HotStarTaq или HotStarTaq Plus
  • QIAGEN PCR Buffer
  • Фактор MP
  • Фактор SB
  • Q-раствор
  • Смесь нуклеотидов

Наборы реагентов для проведения ПЦР в реальном времени

Линейка продукции для стандартной ПЦР (QuantiTect)Линейка продукции для ускоренной ПЦР (QuantiFast)
Для амплификации геномной, вирусной и комплементарной ДНК (анализ мРНК) 
Мастер-микс формат 
Буфер Tris•Cl, KCl, (NH4)2SO4, 5 мМ MgCl2, pH 8.7 
Смесь dNTP нуклеотидов (dATP, dCTP, dGTP, dTTP) 
Красители ROX (или в отдельном контейнере), SYBR green (опционально)
HotStarTaq ДНК полимераза
(Активация при 95°С 15 мин)
HotStarTaq Plus ДНК полимераза
(Активация при 95°С 5 мин)
* Опционально: урацил-N-гликозилаза
(для удаления ПЦР-продуктов, инактивируется при 95°С в течение 15 мин)
QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit (кат. № 204163)
Q-раствор для связывания праймера с полимеразой
* Подходит для проведения ПЦР ДНК, обработанной бисульфитом (тест на метилирование) - EpiTect MethylLight PCR Kit (ROX +/-) Скорость амплификации больше в 3 раза
QuantiTect SYBR Green PCR Kit (ROX +)
QuantiTect Probe PCR Kit (ROX +)
QuantiTect Multiplex PCR Kits (ROX +/-)
QuantiTect Virus Kits (ROX +)
QuantiFast SYBR Green PCR Kit (ROX +)
QuantiFast Probe PCR Kit (ROX +)
QuantiFast Multiplex PCR Kits (ROX +/-)
Type-it Fast SNP Probe PCR Kit (ROX +)

наверх


Наборы реагентов для проведения ПЦР в реальном времени, особенности

Линейка продукции для стандартной ПЦР (QuantiTect)

Линейка продукции для ускоренной ПЦР (QuantiFast)

Линейка продукции для чувствительной ПЦР (QuantiNova)

Для амплификации геномной, вирусной и комплементарной ДНК (анализ мРНК)

Мастер-микс формат

Буфер Tris·Cl, KCl, (NH4)2SO4, 5 мМ MgCl2, pH 8.7

Смесь dNTP нуклеотидов (dATP, dCTP, dGTP, dTTP)

Красители ROX (в составе мастер-микса или в отдельном контейнере), SYBR green (опционально в составе мастер-микса)

Буфер для образца с красителем QuantiNova Yellow Template Dilution Buffer, краситель ROX (в отдельной пробирке), SYBR green (опционально в составе мастер-микса)

HotStarTaq ДНК полимераза

(Активация при 95°С 15 мин)

HotStarTaq Plus ДНК полимераза

(Активация при 95°С 5 мин)

HotStarTaq ДНК полимераза с с QuantiNova Antibody и QuantiNova Guard для предотвращения неспецифической активации

(Активация при 95°С 2 мин)

Длина чтения 60-150 п.о.

* Опционально: урацил-N-гликозилаза

(для удаления ПЦР-продуктов, инактивируется при 95°С в течение 15 мин)

QuantiTect SYBR Green PCR +UNG Kit (кат. № 204163)

В составе мастер-микса находятся компоненты для ускоренного термоциклирования, Q-раствор для связывания праймера с полимеразой

* Подходит для проведения ПЦР ДНК, обработанной бисульфитом (тест на метилирование) - EpiTect MethylLight PCR Kit (ROX +/-)

Скорость амплификации больше в 3 раза

Скорость амплификации больше в 3 раза, выше стабильность (до 100 ч при 30°С, выше специфичность

QuantiTect SYBR Green PCR Kit (ROX +)

QuantiTect Probe PCR Kit (ROX +)

QuantiTect Multiplex PCR Kits (ROX +/-)

QuantiTect Virus Kits (ROX +)

QuantiFast SYBR Green PCR Kit (ROX +)

QuantiFast Probe PCR Kit (ROX +)

QuantiFast Multiplex PCR Kits (ROX +/-)

Type-it Fast SNP Probe PCR Kit (ROX +)

QuantiNova SYBR Green PCR Kit (100) (208052), QuantiNova SYBR Green PCR Kit (500) (208054), QuantiNova SYBR Green PCR Kit (2500) (208056);

QuantiNova Probe PCR Kit (100) (208252), QuantiNova Probe PCR Kit (500) (208254), QuantiNova Probe PCR Kit (2500) (208256)

Для получения более подробной информации о предложениях для постановки ПЦР и ПЦР в реальном времени, а также для получения специфических данных о компонентах наборов для ПЦР QIAGEN и помощи в выборе наборов для ваших целей и задач смотрите соответствующий раздел компании QIAGEN.

Гид для выбора набора ПЦР:


Гид для выбора набора ПЦР
Характеристики наборов для ПЦР:


 Характеристики наборов для ПЦР

наверх