Флороценоз

Подпишитесь
на новости ИЛС

Ваш e-mail:


(бесплатно для звонков по РФ) 8 (800) 100-28-84
+7 (495) 664-28-84

Региональные представители

О КОМПАНИИ НОВОСТИ МЕРОПРИЯТИЯ ЗАКАЗ ON-LINE ОБРАТНАЯ СВЯЗЬ ВАКАНСИИ КОНТАКТЫ

Туберкулез

Туберкулез - хроническая инфекция с длительным периодом выделения возбудителя, многообразием клинических проявлений, поражением различных органов и систем - представляет непростую задачу для лабораторной диагностики. Молекулярно-биологические методы (ПЦР) используются для выявления, видовой дифференциации и определении лекарственной устойчивости микобактерий туберкулезного комплекса. 

Ввиду биологических особенностей возбудителя и иммунного ответа человека диагностика туберкулеза не может ограничиваться каким-либо одним методом и должна проводиться комплексно. 


>>Выбор, предобработка биоматериалов и экстракция ДНК

>>Наборы реагентов для ПЦР-диагностики туберкулеза 

>>Определение лекарственной устойчивости туберкулеза

>>Нормативные документы, публикации, информационные материалы



Выбор, предобработка биоматериалов и экстракция ДНК 

Возбудители туберкулеза могут быть обнаружены в различных биоматериалах, природа которых определяет выбор наборов реагентов для экстракции ДНК. Ключевой принцип выбора биоматериала для диагностики туберкулеза методом ПЦР: необходимо выбирать биоматериал, соответствующий клинической форме туберкулезной инфекции. 

Например, для диагностики туберкулеза мочеполовой системы нужно исследовать мочу или менструальную кровь, рекомендуется также исследовать биоптаты из подозрительного очага. Для диагностики туберкулеза легких используется мокрота, бронхо-альвеолярный лаваж.


Реагенты и оборудование для предобработки биоматериалов и экстракции ДНК

Наборы реагентов для экстракции ДНК из мокроты, бронхо-альвеолярного лаважа, мочи, синовиальной жидкости и смывов с объектов окружающей средыАмплиПрайм ДНК-сорб-В  и
АмплиПрайм РИБО-преп
Реагент для разжижения мокроты и синовиальной жидкости  Муколизин
Набор для экстракции ДНК, используемый при исследовании биоптатов (легкие, лимфатические узлы, почки, печень, мозг, селезенка) ДНК-сорб-С
Оборудование для гомогенизации биоптатовTissueLyser LT или TissueLyser II 
Парафиновые блоки нарезают на микротоме или вырезают фрагмент ткани одноразовым скальпелем, а затем проводят экстракцию ДНК, например, с помощью набора реагентов QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (50)QIAamp DNA FFPE Tissue Kit (50)  

Наборы реагентов для ПЦР-диагностики туберкулеза

Применение молекулярно-биологических методов (в частности, выявление ДНК методом ПЦР) в диагностике туберкулеза регламентировано Приказом Минздрава РФ от 21.03.2003 № 109 "О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации" (ред. от 29.10.2009).


Выявление микобактерий туберкулезного комплекса

Набор реагентов АмплиСенс® МТС-FL предназначен для обнаружения ДНК микобактерий туберкулеза – Mycobacterium tuberculosis complex (MTC), включающий в себя виды микобактерий разной степени вирулентности, вызывающих туберкулез у человека (M.tuberculosis, M.bovis, M.africanum, M.microti, M.canetti, М.pinipedii).

Микобактерии туберкулеза выявляются без видовой дифференциации; микобактерии, не относящиеся к MTC (например, M.avium и M.paratuberculosis) - не выявляются. Данный набор реагентов используется в топической диагностике туберкулеза и позволяет быстро (за несколько часов) с высокой чувствительностью и специфичностью (близким к 100%) определять наличие микобактерий туберкулеза в образце биоматериала.

Благодаря высокой скорости и информативности в диагностике туберкулеза, методы амплификации нуклеиновых кислот (в том числе ПЦР) в 2010 году были предложены CDC США для подтверждения диагноза туберкулеза наряду с культуральным методом.


Видовая дифференциация микобактерий туберкулеза методом ПЦР

Не менее важно дифференцирование до вида внутри группы MTC. Это связано с необходимостью определения источника заболевания, определения тактики противотуберкулезной терапии, а также для подтверждения случаев поствакцинальных осложнений. 

С этой задачей позволяет справиться набор реагентов АмплиСенс® МТС-diff-FL, предназначенный для дифференцирования видов микобактерий туберкулеза внутри MTC: человеческого (M.tuberculosis), бычьего (M.bovis) и вакцинного штамма (M.bovis BCG) – в клиническом материале и культурах микроорганизмов.

Актуальность видовой дифференциации определяется, например, тем, что разные виды микобактерий отличаются профилем лекарственной устойчивости. Например, M.bovis и её вакцинный штамм M.bovis BCG отличаются природной резистентностью к одному из основных противотуберкулезных препаратов - пиразинамиду. Поэтому при туберкулезе, вызванной M.bovis, и БЦЖите пиразинамид не назначается. 

Видовая дифференциация микобактерий туберкулеза имеет особую ценность в диагностике БЦЖита (осложнений от введения вакцины БЦЖ). Несмотря на то, что в МР № 99/219 «Диагностика поствакцинальных осложнений после введения вакцины БЦЖ» сказано, что использование предложенного диагностического комплекса (культуральное исследование + ИФА для обнаружения антигена) позволяет в 100% случаев верифицировать диагноз БЦЖит, очевидно, что данные методы не позволяют дифференцировать M.bovis от ее вакцинного штамма M.bovis BCG. 

Приказом Минздрава РФ от 21.03.2003 № 109 "О совершенствовании противотуберкулезных мероприятий в Российской Федерации" (ред. от 29.10.2009) регламентировано применение наборов реагентов, дифференцирующих M.bovis от ее вакцинного штамма M.bovis BCG, для диагностики БЦЖита.

Наверх

Определение лекарственной устойчивости туберкулеза

Распространение штаммов туберкулеза с лекарственной устойчивостью, в том числе с множественной лекарственной устойчивостью (МЛУ, или MDR) составляет одну из серьезнейших проблем современного здравоохранения. Определение лекарственной устойчивости туберкулеза с помощью молекулярно-биологических методов всё шире применяется ввиду высокой скорости получения результатов (1-2 дня), что становится возможным благодаря использованию не только первичной культуры, но и непосредственно клинического материала.

Важно понимать, что наборы реагентов, основанные на разных молекулярно-биологических методах, характеризуются разными показателями диагностической чувствительности и специфичности. 

Методы непрямого выявления мутаций - гибридизационные технологии (ДНК-микрочипы) и выявление отдельных мутаций методом ПЦР - позволяют выявлять только конкретные мутации, внесенные в дизайн диагностических наборов, и/или дикий тип возбудителя. 

Метод секвенирования (прямого прочтения нуклеотидной последовательности ДНК) является «золотым стандартом» в молекулярной диагностике и может определять любые изменения в нуклеотидной последовательности, в т.ч. протяженные инсерции и делеции, а также ранее неизвестные мутации.

Наборы реагентов АмплиСенс® позволяют выявлять мутации устойчивости микобактерий туберкулеза к рифампицину и пиразинамиду методом секвенирования по Сэнгеру:

Наименование набора реагентовАмплиСенс® MTC-Rif-Seq АмплиСенс® MTC-PZA-Seq 
Исследуемый генrpo Bpnc A
Препараты, к которым определяется устойчивостьрифампицинпиразинамид
Кол-во выявляемых мутацийболее 200более 500

Наборы включают реагенты для амплификации фрагментов ДНК микобактерий туберкулеза, очистки продуктов амплификации (сорбентным методом), определения концентрации очищенного продукта амплификации и праймеры для секвенирования. Наборы для экстракции ДНК (АмплиПрайм РИБО-преп  или ДНК-сорб-С ) и реагенты для проведения реакции секвенирования приобретаются отдельно.

Каждый нуклеотид при секвенировании определяется дважды благодаря прочтению ДНК в двух направлениях (прямой и обратной цепей), что обеспечивает максимальную точность результата. Входящее в состав наборов реагентов программное обеспечение «ДЕОНА» обладает дружественным русскоязычным интерфейсом и позволяет проводить сборку, анализ и редактирование нуклеотидной последовательности. В результате формируется отчет о наличии или отсутствии устойчивости микобактерий туберкулеза к противотуберкулезным препаратам.

См. также Наборы реагентов для ПЦР-диагностики туберкулеза у животных