Флороценоз
(бесплатно для звонков по РФ) 8 (800) 100-28-84

Поиск по сайту

Каталог Партнеры Акции Новости О компании Контакты

ПЦР-диагностика конго-крымской геморрагической лихорадки (ККГЛ)

Конго-крымская геморрагическая лихорадка (ККГЛ) - широко распространенная болезнь, которую вызывает передаваемый клещами вирус. Вирус ККГЛ вызывает вспышки тяжелой геморрагической лихорадки, при которой летальность достигает 40%.

Геморрагическая лихорадка Крым-Конго распространена в Африке, на Балканах, на Ближнем Востоке и в азиатских странах к югу от 50-й параллели северной широты, совпадая по ареалу с географической границей распространенности клещей рода Hyalomma, являющихся основными переносчиками.

Сезонность инфекции на юге России — с мая по август. Вспышки заболевания ежегодно бывают в Краснодарском и Ставропольском крае, Волгоградской, Астраханской и Ростовской областях, в республиках Калмыкия, Дагестан и Карачаево-Черкесии.

Переносчиками вируса ККГЛ являются дикие и домашние животные (крупный рогатый скот, овцы и козы). Животные инфицируются при укусе инфицированных клещей, и вирус остается в их кровотоке примерно в течение недели после заражения, что при последующих укусах клещей обеспечивает продолжение цикла «клещ-животное-клещ». Людям вирус ККГЛ передается при укусах клещей, при контакте с инфицированными кровью или тканями животных во время и непосредственно после забоя. Значительное число случаев заражения приходится на людей, занятых в промышленном животноводстве. Передача от человека человеку может происходить в результате тесного контакта с тканями и биологическими жидкостями инфицированных людей, возможны случаи внутрибольничной инфекции.

Возможности клинической диагностики ККГЛ ограничены, поскольку множество инфекций, включая трансмиссивные, протекают с развитием геморрагического и/или ДВС-синдрома. В современной практике чаще всего применяются три метода диагностики ККГЛ: вирусологический, серологический и молекулярно-биологический.


Методы диагностики ККГЛ

Вирусологический метод является «золотым стандартом» диагностики, но может применяться только в лабораториях, имеющих разрешение и возможность работы с микроорганизмами II группы патогенности; также этот метод характеризуется меньшей диагностической чувствительностью, нежели ПЦР.

Наиболее широко в практической диагностике используется выявление IgG- и/или IgM-антител в сыворотке крови методом ИФА. Принципиальным ограничением ИФА-диагностики ККГЛ является то, что IgM-антитела появляются на 5-7 день заболевания, а IgG-антитела - не ранее 2-ой недели болезни. Таким образом, серологические методы не могут обеспечить своевременную диагностику заболевания, что создает проблемы для выбора адекватной терапии, своевременного проведения противоэпидемических мероприятий, предотвращения внутрибольничного инфицирования больных и персонала. Серологический метод пригоден для постановки окончательного диагноза перед выпиской больного, то есть имеет в основном ретроспективное эпидемиологическое значение.

Молекулярно-биологические методы (в частности - ПЦР) направлены на обнаружение РНК вируса ККГЛ в различных биологических материалов от больных. Наиболее информативным биоматериалом для ПЦР-исследования является плазма крови; допускается использование сыворотки. Принципиальным преимуществом ПЦР-диагностики ККГЛ является то, что вирусная нагрузка в крови больного при госпитализации высока и сохраняется у большинства больных вплоть до 7-14 дня заболевания. Таким образом, диагностика возможна в ходе всего лечения, в том числе в критический момент поступления в стационар, когда сероконверсия (IgM) наблюдается лишь у 3-7% больных и метод ПЦР незаменим: чувствительность и специфичность ПЦР-диагностики в этот период превышает 95%. Метод ПЦР также используется в эпидемиологических исследованиях для выявления РНК вируса ККГЛ в популяции клещей. Поскольку вакцинация от ККГЛ для людей или животных не проводится, такие мероприятия очень важны для предотвращения заражения людей и возникновения вспышек.


Реагенты для выявления конго-крымской геморрагической лихорадки

Набор реагентов АмплиСенс® CCHFV-FL предназначен для выявления РНК вируса геморрагической лихорадки Крым-Конго в клиническом материале (плазма и сыворотка крови) и клещах методом ОТ-ПЦР. Реакции обратной транскрипции и ПЦР совмещены в одном этапе (one step), что обеспечивает простоту и высокую скорость анализа.

Рекомендации по пробоподготовке клещей рода Hyalomma:

Состояние клещейРекомендации по пулированиюОбъем физ. раствора/PBS для гомогенизацииОбъем клещевой суспензии для экстракции РНКНабор реагентов для экстракции РНК
голодныепо 5-7 особей700 мкл50 мклАмплиПрайм РИБО-преп 
полунапитавшиесяпо 2-3 особи1000 мкл50 мклАмплиПрайм РИБО-преп 
полностью напитавшиесяне пулировать, исследовать индивидуально1000 мкл100 мклРИБО-золь-В 

Для экстракции РНК из плазмы и сыворотки крови рекомендуется использовать набор реагентов АмплиПрайм РИБО-преп

Для гомогенизации клещей рекомендуется использовать гомогенизаторы TissueLyser LT  или TissueLyser II.


Нормативные документы

МУК 4.2.3007-12 Порядок организации и проведения лабораторной диагностики Крымской геморрагической лихорадки для лабораторий территориального, регионального и федерального уровней (Скачать)

МУ 3.1.1.2488-09 Организация и проведение профилактических и противоэпидемических мероприятий против Крымской геморрагической лихорадки (Скачать)

Публикации

Крымская геморрагическая лихорадка в Евразии в XXI веке: клиника и диагностика (2012) (Читать статью на сайте CMD)